Методы цитологических исследований | Ценная информация

Методы цитологических исследований

Методы цитологических исследований

Под световой микроскопией понимают методы исследований при использованию светового (оптического) микроскопа. Основываются на том, что сквозь полупрозрачный или прозрачный объект исследований проходят лучи света. Дает возможность изучать общий план строения клетки и отдельных ее органелл, размеры которых составляет не меньше 200 нм. Современные световые микроскопы обладают кратностью увеличения объекта в 2-3 тыс. раз. Существуют разные виды световой микроскопии: поляризационная, флуоресцентная, ультрафиолетовая, фазово-контрастная и т. п. Через световой микроскоп можно наблюдать определенные процессы их жизнедеятельности и общее строение клеток или– деление, движение клетки, перемещение цитоплазмы и т. п. Возможно прижизненное изучение клетки.

Исследование клетки с помощью электронного микроскопа называется электронной микроскопией. Способна увеличивать изображение объектов до 500 000 раз и больше. Позволяет изучать маленькие объекты, органеллы крохотных размеров (рибосомы и т. п.), строение плазматических мембран. Для электронной микроскопии препараты обрабатывают определенным образом (зачастую тяжелыми металлами). После этого органеллы и прочие клеточные структуры приобретают разную степень поглощения электронов и потому выделяются на экране или фотопленке.

Электронный микроскоп подобен по принципу конструкции световому. В магнитном поле вместо потока света движется поток электронов от катода к аноду, который ускоряется высоким различием потенциалов между полюсами. Роль линз выполняют электромагниты. Они могут собирать электроны в пучок (фокусировать), а также изменять направление движения электронов, и направлять его на объект исследования. Часть электронов может отражаться, рассеиваться, поглощаться, проходить через объект без изменений или взаимодействовать с ним. Электроны попадают на люминесцентный экран (возбуждают его свечение), или на особую фотопленку (можно фотографировать изображение объекта).

Метод трансмиссионной электронной микроскопии при рассеивании пучка электронов объектом создается изображения на флуоресцентном экране микроскопа. Чем больше способность рассеивать поток электронов тем или иным участком, тем более темными они выглядят на экране.

Метод растровой (сканирующей) электронной микроскопии позволяет изучить трехмерное изображение поверхности клетки вследствие пробегания пучка электронов по поверхности объекта.

Метод меченых атомов: для изучения места хода тех или других биохимических процессов в клетку вводят вещество, в котором один из атомов определенного элемента замещен его радиоактивным изотопом (углерода, кислорода, азота, фосфора). С помощью специальных приборов, способных фиксировать эти изотопы, определяют характер биохимических процессов и локализацию, можно также проследить за миграцией изотопов в клетке.

Метод фиксирования живых объектов используют, применяя определенные вещества (формалин, спирты и т. п. ), или быстрым замораживанием, или высушиванием.

Особыми красителями окрашивают отдельные структуры фиксированных клеток. Эти красители окрашивают только определенные структуры клетки, что позволяет получить их контрастную окраску.

Для изучения отдельных клеточных структур применяют метод центрифугирования. Измельченные объекты размещают в центрифуге. При очень быстрых оборотах эти объекты будут оседать слоями, так как различные клеточные структуры обладают неодинаковой плотность.

Более плотные органеллы будут оседать на дне. Слои разделяют и изучают в отдельности.

Оставить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *